Ekki ist in festen Händen, und seine Freundin Silke plant, mit ihm in eine gemeinsame Wohnung zusammenzuziehen. Da wird er von der Sport- und Geschichtsstudentin Charlotte in der Kneipe Freibeuter in einen handfesten Flirt verwickelt. Ekki ahnt nicht, dass es sich um eine von seiner von krankhafter Eifersucht beherrschten Freundin engagierten Treuetesterin handelt. Er ist für einen Seitensprung bereit, doch unterbricht kurzzeitig den Flirt, um die Toilette aufzusuchen. Als er zurückkehrt, ist Charlotte verschwunden. Ekki war der letzte Partner, auf den sie angesetzt war.
Am folgenden Tag erkennt Ekki Charlotte in den Fernsehnachrichten wieder. Sie soll sich aus einem Fenster in den Tod gestürzt haben.
Da Ekki bezweifelt, dass die lebensfrohe Frau Selbstmord begangen hat, bittet er seinen langjährigen Freund Georg Wilsberg, den Fall zu untersuchen. Dieser wird von Yasmin, die in der Feldhockey-Damenauswahl der Münsteraner Universität spielt, mit einem Hockeyschläger niedergestreckt, nachdem er sich Zutritt zu ihrer Wohnung verschafft hat. Nachdem er sein Bewusstsein wieder erlangt hat, erfährt er im Gespräch mit Yasmin, dass sie gemeinsam mit ihrer Kollegin Charlotte nach eigener Aussage als Privatinvestigatorin für „professionelle Beziehungsprüfung mit Experimental-Diagnose“ tätig war. Als Treuetesterinnen ließen sich die beiden von misstrauischen Ehefrauen engagieren und hatten sich durch ihre Tätigkeit in der Münsteraner Männerwelt viele Feinde gemacht. Um weitere Informationen einzuholen, schließt sich Wilsberg der Selbsthilfegruppe „Bitteres Ende e.V.“ für frustrierte Scheidungsopfer an. Diese Ex-Ehemänner haben sowohl ihre Frauen als auch ihr Vermögen durch die Scheidung verloren, denn die Treuetesterin Yasmin spielte mit ihnen ein gefährliches doppeltes Spiel. Sie ließ sich nicht nur von ihren Auftraggeberinnen entlohnen, sondern erpresste zudem die untreuen Männer mit belastendem Fotomaterial.
Die noch frische Beziehung von Wilsbergs Nichte Alex Holtkamp mit dem Scheidungsanwalt Jan Faber muss sich derweil bewähren. Alex will ihm nicht so recht vertrauen und hat Recht damit. Er hatte geschäftliche Beziehungen zu den Treuetesterinnen und ließ sich von ihnen die betrogenen Ehefrauen vermitteln, um von ihrer Scheidung zu profitieren. Als Yasmin im Gerichtsgebäude auftaucht und noch ausstehende Zahlungen von Jan einfordert, kommt zufällig Alex dazu, wird Zeuge der Unterhaltung und beendet daraufhin die Beziehung.
Ekki schlussfolgert, dass Silke noch nicht von Charlotte erfahren hat, dass er durch den Treuetest gefallen ist. Daher bittet er Wilsberg, ihm zu helfen, das Ergebnis zu vertuschen. Doch Wilsberg gibt Ekki als zentrale Frage zu bedenken: „Überleg Dir, was schlimmer ist, fremdzugehen oder den eigenen Partner auf Treue zu testen.“ Letztlich trennt sich auch Ekki von seiner Freundin Silke, die ihn aus Eifersucht und Angst vor Untreue mittels installierter Kameras in seiner Wohnung überwachte.
Unterdessen soll ein Schutzgelderpresser unter der Leitung von Kommissar Greinert überführt werden. Kommissarin Springer lässt ihren Assistenten Overbeck verdeckt ermitteln, was er zunächst in seiner lässigen Art brillant meistert, dann aber doch total vergeigt. Von dem Fall entbunden, widmen sich Springer und Overbeck dem zuerst als Selbstmord eingestuften Tod von Charlotte. Während Kommissarin Springer Stück für Stück der Lösung näherzukommen scheint, ist Wilsberg ihr wie immer einen Schritt voraus. Nachdem er sogar den Laptop der Toten kurzfristig aus dem Präsidium „entliehen“ hat, kommt er dem Mörder entscheidend nah. Es muss etwas mit den Fotos zu tun haben, die offensichtlich in der Tatnacht von der Festplatte des Laptops gelöscht wurden. Seine Hoffnung, dass Charlottes Partnerin Yasmin alle Fotos vorher ausgedruckt hatte, erfüllt sich. Während er die Bilder bei ihr sichtet, klingelt es an der Tür und ein Polizeibeamter bittet um Einlass. Es ist Kommissar Greinert, den Wilsberg just in diesem Moment auf den Fotos im Hintergrund entdeckt, als er sich mit dem Schutzgelderpresser trifft, gegen den er eigentlich ermitteln soll. Ehe Wilsberg reagieren kann, hat Greinert schon seine Waffe gezogen und droht, beide zu erschießen. Als Retter erscheinen nun Ekki und Alex, die auf der Suche nach Wilsberg waren, und schlagen Greinert mit Yasmins Hockeyschläger zu Boden. Nun stürmen auch die Polizeibeamten Springer und Overbeck die Wohnung. Greinert wird von Overbeck wegen des Mordes an Charlotte Sander, Bildung einer kriminellen Vereinigung und Amtsmissbrauch zur Vertuschung schwerer Straftaten verhaftet.
Nachdem sich Alex von Jan und Ekki von Silke getrennt haben, versuchen Silke und Jan ihr Glück und treffen sich zu einem Blind Date in einem Café am Prinzipalmarkt.